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透射熒光顯微鏡與反射熒光顯微鏡的區(qū)別及優(yōu)缺點 - 分析行業(yè)新聞
來源: | 發(fā)布日期:2023-02-02 16:07
 

1.透射式熒光顯微鏡:激發(fā)光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發(fā)熒光的。常用暗視野集光器,也可用普通集光器,調(diào)節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉(zhuǎn)射和旁射到標本上.這是比較舊式的熒光顯微鏡。其優(yōu)點是低倍鏡時熒光強,而缺點是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱.所以對觀察較大的標本材料較好。

2.落射式熒光顯微鏡:這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,它與光鈾呈45度角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強。

透射熒光顯微鏡的優(yōu)點及缺點

光源:高壓汞燈或鹵素?zé)簟?/p>

聚光鏡:使用暗場聚光鏡,使激發(fā)光和熒光分離出來。

物鏡:可用任何種類的物鏡。

標本:因為是透射觀察,薄的標本比較適合。

優(yōu)點:①由于用了暗場聚光鏡,激發(fā)光不能進入物鏡,因此容易形成暗的背景,得到良好的反差,且任何物鏡都可用于觀察。②用低倍物鏡時,比反射熒光顯微鏡更亮。

缺點:必須正確調(diào)整聚光鏡中心和高度,否則不能獲得明亮的熒光像。由于暗視場聚光鏡焦距限制,不能使用厚的載玻片。視場照明區(qū)不能過大,否則容易使熒光標本熒光色衰褪。厚的或不透明的標本不適用。

反射熒光顯微鏡的優(yōu)點及缺點
光源:高壓汞燈或鹵素?zé)簟?/p>

聚光鏡:因為物鏡作為聚光鏡,所以不需要聚光鏡。

物鏡:所用物鏡必須能透過足夠的紫外光,而且本身不產(chǎn)生熒光,對數(shù)值孔徑?jīng)]有限制。

標本:厚的標本或不透明的標本都能觀察。

優(yōu)點:①由于物鏡兼作聚光鏡,不需要很多調(diào) ??????y????????V3910 節(jié)。②采用柯拉照明法,可利用孔徑光闌和視場光闌的效果。③物鏡數(shù)值孔徑不受限制,在高放大倍率時,也可以獲得高分辨率的像。④厚的或不透明的標本也能觀察,厚的蓋玻片也能使用。⑤其它觀察法也能與反射熒光結(jié)合使用,特別和相差法和透射微分干涉差法相結(jié)合。⑥可以避免不必要的熒光色衰褪現(xiàn)象。

缺點:在用地倍率物鏡時,像比較暗,因此必須用大數(shù)值孔徑的物鏡。濾光鏡系統(tǒng)必須有效地分離開激發(fā)光和熒光。




【本文標簽】

【責(zé)任編輯】微儀顯微鏡

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